БАКТЕРИИ ПРИОБРЕТАЮТ ИНВАЗИВНУЮ АКТИВНОСТЬ ПОСЛЕ ТРАНСФОРМАЦИИ ПЛАЗМИДОЙ, СОДЕРЖАЩЕЙ ГЕН ПРОТЕАЛИЗИНА
Цаплина О.А., Ефремова Т.Н., Кевер Л.В. и др.
Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург (Россия), Институт молекулярной генетики РАН, Москва (Россия).
E-mail: olga566@mail.ru
Инвазия – это процесс взаимодействия бактериальной и эукариотической клеток, в котором активную роль играет цитоскелет. Ранее была показано, что непатогенные бактерии, синтезирующие металлопротеазу ЕСР 32/гримелизин, ограниченно расщепляющую актин, способны проникать в эукариотические клетки, вызывая реорганизацию их актинового цитоскелета. Способность к инвазии была также обнаружена у бактерий Serratiaproteamaculans, синтезирующих термолизиноподобную протеазу протеализин. Экстракты бактерий S. proteamaculansограниченно расщепляют актин в сайте, вовлеченном в образование межмономерных контактов в полимере. Эти данные указывают на то, что присутствие протеализина способствует интернализации бактерий, синтезирующих этот фермент. Поэтому цель данной работы состояла в том, чтобы выяснить, приобретают ли рекомбинантные бактерии E. coli, в которые введен ген протеализина, способность к инвазии в эукариотические клетки. С этой целью бактерии E. coliBL21 DE3, не обладающие способностью к инвазии, трансформировали плазмидой pET23b, содержащей ген протеализина. Лизаты бактерий E. coli, полученных в результате трансформации, обладали высокой актиназной активностью. По данным конфокальной и электронной микроскопии, эти бактерии проникали в клетки карциномы Hep-2. Показано также, что лизаты E.
coli, синтезирующих рекомбинантный протеализин с точечной заменой глутаминовой кислоты на аланин в активном сайте, обладали более низкой актиназной активностью. Бактерии, синтезирующие мутантный протеализин, также проникали в клетки Hep-2, но вызывали меньшие перестройки актинового цитоскелета. Таким образом, после введения гена протеализина неинвазивные бактерии приобретают способность к инвазии.
Loading ...