BioScience Blog – Научный Биологический блог

Впоследние годы при усовершенствовании многих технологических процессов широко используются гидролитические ферменты микроорганизмов. Исследование физико-химических свойств, кинетико-термодинамических параметров, особенностей фермент-субстратных взаимодействий при осуществлении акта катализа гидролитическими ферментами способствуют существенному изменению и усовершенствованию многих известных технологий и созданию новых.

Среди всех существующих методов установления механизмов ферментативных реакций одним из наиболее простых и полезных является метод ингибирования продуктами реакции. В связи с этим нами было изучено влияние олеиновой и стеариновой кислот на физико-химические свойства липазы из Rhizopusniveus.

Определение каталитической активности исследуемых ферментных препаратов проводили спектрофотометрическим методом. Определение количества белка в препарате растворимой липазы осуществляли методом Лоури.

Показано, что воздействие олеиновой и стеариновой кислот в концентрациях 10-2 – 10-3 моль/л не вызывает статистически достоверных изменений в активности липазы. Снижение каталитической активности фермента наблюдается при воздействии 1 моль/л олеиновой кислоты и 10-1 моль/л стеариновой кислоты. Показано, что инкубация липазы с олеиновой кислотой в концентрации 3 моль/л приводит к снижению каталитической активности фермента на 61%, а инкубация фермента со стеариновой кислотой в той же концентрации – на 76 %.

Для выявления механизма ингибирования липазы олеиновой и стеариновой кислотами была изучена зависимость активности фермента от концентрации субстрата в присутствии олеиновой и стеариновой кислот и рассчитаны кинетические параметры реакции гидролиза (таблица 1).

Таблица 1. Кинетические параметры реакции гидролиза оливкового масла нативной липазой и липазой поле инкубации с олеиновой и стеариновой кислотами.

Показано, что присутствие как олеиновой, так и стеариновой кислот приводит к смешанному ингибированию липазы.