BioScience Blog – Научный Биологический блог

Шах М.Р., Филимонова М.Н.

Внеклеточная эндонуклеаза (КФ 3.1.4.9) Грам отрицательных бактерий Serratiamarcescensявляется одним из наиболее изученных ферментов в ряду бактериальных нуклеаз с широкой специфичностью. Нуклеаза S. marcescens(Sma nuc) расщепляет одно и двухцепочные ДНК и РНК с образованием фрагментов разной степени полимерности, фосфорилированных в 5´-положении. Благодаря биологической активности эндонуклеазу применяют на практике (Аликин и др, 1998). Несмотря на значительный прогресс в исследовании Sma nuc: установлены ключевые биохимические свойства, структура, механизм действия, – изучение нуклеазы продолжается. В частности, задачей настоящего исследования было проведение анализа динамики роста и биосинтеза нуклеазы рекомбинантным штаммом S.marcescensprt4, несущим плазмиду со структурным геном nuc. Для решения поставленной задачи провели отбор наиболее активного по нуклеазе клона бактерий на селективной питательной среде, включающей ДНК или РНК и индикатор метиловый зеленый. Затем отобранный клон выращивали на среде LB, содержащей 0,05% ампициллина, при 37°С. Установлено, что биосинтез эндонуклеазы представляет двухступенчатый процесс, проявлением которого служат два пика активности на кривой накопления нуклеазы в питательной среде. Вершина первого пика с 18-ым часом роста и развития микробной популяции, второго – с 23-им часом, что соответствовало стационарной фазе. При этом уровень активности фермента на 23-ий час культивирования бактерий был выше, чем на 18-ый час. В обоих случаях эндонуклеаза была представлена двумя изоформами, что установлено электрофорезом в полиакриламидном геле в сочетании с субстратным блоттингом.

Литература

1.  Аликин Ю.С., Сенженко Л.П. (1998) Развитие технологии получения и перспективы использования эндонуклеазы Serratiamarcescens // Ферменты микроорганизмов: Сб. Докладов XI Всероссийской конференции. Казань, с. 152-163