BioScience Blog – Научный Биологический блог

Для отбора трансгенных растений традиционно используют селективные гены устойчивости к антибиотикам и гербицидам или гены-репортеры. Используемые в настоящее время коммерческие трансгенные растения с устойчивостью к вредителям и гербицидам представляют существенную потенциальную биологическую и экологическую опасность, связанную с их негативным влиянием на полезные организмы агробиоценозов. В связи с этим остро стоит проблема разработки методов получения трансгенных растений нового поколения без "генетического мусора", к которому относятся селективные гены устойчивости к антибиотикам и гербицидам и другие маркерные гены.

Целью настоящей работы явилось получение трансгенных растений, экспрессирующих ген поверхностного антигена вируса гепатита В, без применения маркерных селективных генов.

Нами сконструирована плазмида рВМ, не содержащая маркерных генов для отбора трансгенных растений. В эту плазмиду встроили ген поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) под контролем двойного промотора 35S РНК вируса мозаики цветной капусты. Полученную плазмиду pBM-Ag перенесли в штамм A. tumefeciens LBA4404 (pAL4404), который использовали для трансформации листовых эксплантов табака и семян табака и томата.

Получено несколько линий растений табака и томата, синтезирующих HBsAg на уровне до 0.05% от общего растворимого белка. Метод трансформации семян оказался экономичным по времени отбора трансформантов и позволил нам повысить частоту агробактериальной трансформации до 15-20%.

Достигнутый уровень синтеза HBs-антигена в клетках томата достаточен для проведения доклинических испытаний полученных растений в качестве безопасной "съедобной" вакцины нового поколения.