BioScience Blog – Научный Биологический блог

Миелопероксидаза (МПО) – прооксидантный фермент лейкоцитов является маркером воспалительных заболеваний. Повышение МПО при инфаркте миокарда связано с риском смертельного исхода. Для точного измерения уровня МПО, мы разработали высокочувствительный твердофазный иммуноферментный метод определения концентрации МПО в образцах биологических жидкостей. В нашем методе используются два вида антител против МПО, полученных от разных видов лабораторных животных, крыс и кроликов. Моноспецифические поликлональные антитела против МПО человека получали путем иммунизации кроликов и крыс. Для измерения содержания МПО в образцах, проводили пассивную сорбцию антител крыс против МПО на полистирольной поверхности лунок планшета. Затем в лунки вносили образцы и, после сорбции, в лунки добавляли антитела кролика против МПО. После этого добавляли в систему меченные пероксидазой хрена антитела против антител кролика, затем хромогенный субстрат. После развития окраски, данные считывали на планшетном фотометре. Концентрацию МПО в биологических образцах рассчитывали по калибровочному графику. На этапе разработки метода были подобраны оптимальные условия сорбции антител крысы на поверхности планшета (рН буферного раствора, время сорбции, концентрация антител), разведения стандартных растворов и образцов, антител кролика и меченных пероксидазой антител. Проведенные измерения показали, что концентрация МПО составляет 0.15 – 0.35 мкг/мл в сыворотке крови здоровых доноров и повышается до 0.75 – 0.9 мкг/мл у больных атеросклерозом, и до 0.8 – 4 мкг/мл у больных с воспалительными процессами различной степени тяжести.