ИММУНОФЕРМЕНТНОЕ ВЫЯВЛЕНИЕ АНТИГЕНОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ НАНОЧАСТИЦ ЗОЛОТА
Бурыгин Г.Л., Хлебцов Н.Г.
Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН, Саратов (Россия).
E-mail: gena@ibppm.sgu.ru
Развитие современных методов анализа идёт, в основном, путём миниатюризации, удешевления и повышения эффективности. Одним из популярных подходов к этому, в последние годы, стало использование нанотехнологий, в частности наночастиц золота, которые уже нашли разнообразное применение в биомедицинских исследованиях. Так, коллоидное золото уже довольно давно используется как маркер в иммуноокрашевании образцов для электронной микроскопии и в дот-блот-анаизе. В нашей работе мы использовали наночасицы золота как мультипликаторы сигнала о взаимодействии антиген-антитело, основываясь на том, что одна наночастица при функционализации адсорбирует (в зависимости от размера) на своей поверхности от десятка до сотен молекул антител в случайной ориентации. Такие конъюгата IgG с коллоидным золотом имеют несколько как антигенсвязывающих центров, так и свободных Fc-фрагментов, выявляемых «вторыми» анти-антителами, связанных ковалентной связью с ферментом.
Иммуноферментный анализ в полистирольных планшетах с использованием предложенного подхода оказался незначительно (в 2 раза) эффективней традиционного метода по выявлению антигенов, но при этом расход антител был на два порядка меньшим. Использование конъюгатов как «первых» антител в дот-блот-анализе на нитроцеллюлозе позволило на порядок повысить чувствительность метода выявления антигена, при таком же значительном снижении использования антител. Следует отметь, что в обоих вариантах иммуноферментного анализа наблюдалась обратная зависимость между повышением эффективности анализа и увеличением размеров наночастиц золота, чему дано теоретическое объяснение.
Таким образом, показано, что использование конъюгатов на основе наночастиц в иммуноферментном анализе повышает эффективность выявления антигенов при значительном снижении стоимости метода.
Loading ...