ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СИСТЕМЫ АЭРОПОНИКИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЦЕЛЕВЫХ БЕЛКОВ В КОРНЯХ РАСТЕНИЯ
Архипенко М.В., Никитин Н.А., Мартиросян Ю.Ц., Карпова О.В.
МГУ имени М.В. Ломоносова, Москва (Россия),
ВНИИ сельскохозяйственной биотехнологии РАСХН, Москва (Россия).
E-mail: armar@genebee.msu.ru
Предлагается технология агроинфицирования растений, культивированных в системе аэропоники, позволяющая получить продукцию ЦБ в корнях растений, в том числе съедобных, на высоком уровне за короткий период времени. В работе были применены бинарные векторы, содержащие в своем составе копию самореплицирующегося вируса – вектора, продуцента целевых белков (ЦБ). Растения культивировали в универсальной аэропонной установке «Урожай» (биореактор), разработанной ВНИИ сельскохозяйственной биотехнологии РАСХН. Один биореактор состоит из четырех желобов, каждый из которых содержит 12 растений (всего 48 растений), урожайность биореактора 5 кг культуры корней за 3 недели.
Корни растения Brasicanapus(рапс) инокулировали суспензией агробактерии с плотностью от 0,5 – 0,6 OD600, 1000 мл суспензии агробактерий добавляли в бак биореактора объемом 100 л с питательным раствором.. Агробактерии содержали вирусный вектор (crTMV-GFP), полученный ранее на кафедре вирусологии биологического факультета МГУ, который был сконструирован на основе генома штамма вируса табачной мозаики, заражающего крестоцветные, с заменой гена белка оболочки целевым геном зеленого флуоресцентного белка – GFP (Green Fluorescent Protein). Наличие продукции целевого белка GFP в корнях рапса регистрировали по свечению в ультрафиолете при длине волны 365 нм на 7-10 день после агроинфильтрации, а также с помощью Вестерн-блот анализа. Определено, что количество целевого белка составляет 1,25 мг на 1 г биомассы корня. То есть, в результате одного цикла культивирования растений в системе аэропоники с последующим проведением агроинфильтрации агробактерий в растение insituс использованием вирус-вектора может быть получено 6,5 г целевого белка за 3 недели.
Loading ...