BioScience Blog – Научный Биологический блог

Максименко О.Г., Куршакова М,М., Краснов А.Н., Георгиев П.Г.

Наиболее хорошо изученным инсулятором у D.melanogasterявляется инсулятор Su(Hw) из ретротранспозона МДГ4. Он содержит 12 сайтов связывания для белка Su(Hw). В последнее время много внимания уделяется эндогенным 8и(Н\у)-зависимым инсуляторам. Так, очень удобным для изучения инсулятором оказался 1А2 инсулятор, расположенный в конце гена yellow, содержащий 2 сайта связывания для белка Su(Hw), обладающий и энхансер-блокирующей и барьерной инсуляторными активностями. Ранее было показано, что в реализации этих активностей важную роль играет белок Su(Hw). Но одновременно было продемонстрировано и то, что критичным является и работа других белковых факторов. Так, используя трансгенные модельные системы мы продемонстрировали, что и в инсуляторе 1А2 и в инсуляторе из ретротранпозона МДГ4 за энхансер-блокирующую активность отвечает белок Mod(mdg4), который в то же время никак не задействован в реализации барьерной активности инсуляторов. Далее мы приступили к поиску компонента, участвующего в реализации барьерной активности 8и(Н\у)-зависимых инсуляторов. При помощи дрожжевого двугибридного скрининга библиотеки кДНК в качестве одного из белков, взаимодействующих с белком Su(Hw), был идентифицирован белок Е(у)2 -транскрипционный фактор, связывающийся с гистоновой ацетилазой GCN5, факторами транскрипции TAF9 и TAF10. Это взаимодействие было подтверждено коиммунопреципитацией на культуре клеток S2 D.melanogaster. Кроме этого была показана колокализация белков Su(Hw) и Е(у)2 на политенных хромосомах и доказано присутствие избытка белка Е(у)2 у описанных в геноме сайтов связывания белка Su(Hw). После этого мы провели анализ влияния белка Е(у)2 на барьерную активность 8и(Н\у)-зависимых инсуляторов на созданных ранее модельных трансгенных системах в D.melanogaster. В трансгенные линии мух мы могли вводить мутации по генам, кодирующим белки Su(Hw) и Е (у)2. В результате нами было показано, что белок Е(у)2 принимает непосредственное участие в реализации барьерной активности 8и(Н\у)-зависимых инсуляторов. Более того, важность взаимодействия белков Su(Hw) и Е(у)2 в регуляции генной экспрессии подтвердилась достаточно сильными синергичными эффектами при введении в линии мух мутаций одновременно по двум генам. Дополнительная проверка подтвердила, что на энхансер-блокирующую функцию инсуляторов белок Е(у)2 не оказывает влияния. Таким образом для того чтобы 8и(Н\у)-зависимые инсуляторы могли служить барьерами распространения зон зарепрессированного хроматина необходим дополнительный белок – Е (у)2, – который непосредственно взаимодействует с белком Su(Hw). В дальнейшем мы планируем проведение дополнительных экспериментов, направленных на изучение конкретного механизма, превращающего белок Е(у)2 в эффективную инсуляторную границу.