Кленов Р.О. Генерация пептидных соединений эритроцитами человека при действии цАМФ
Многие биологические активные соединения имеют пептидную природу. Пептидная биорегуляция – одна из самых сложных и многофункциональных систем регуляции в живых организмах. Изучение механизмов пептидной регуляции стало основой появления концепции существования в организме непрерывной совокупности регуляторных пептидов (континуума пептидов) обеспечивающих стимуляцию или подавление любых процессов жизнедеятельности. В течение ряда лет были получены данные о наличии у эритроцитов человека эндокринной функции, связанной с внутриклеточными процессами расщепления гемоглобина и генерацией биологически активных пептидных фрагментов в плазму. Образующиеся пептидные молекулы обладают широким спектром биологической активности – опиоидной, рилизинговой, эритропоэтиновой. Лизис гемоглобина осуществляется высокоспецифическими протеазами на внутренней стороне мембраны эритроцита, однако механизм их активации изучен недостаточно (Шаталаева, 2003). Ранее, нами было установлено увеличение содержания пептидов в клетках при действии адреналина в повышенных и физиологических концентрациях, что указывает на возможность активации примембранного комплекса протеаз через фосфорилирование специфическими протеинкиназами, которые в свою очередь активируются цАМФ в результате активации аденилатциклазного комплекса. Наибольший эффект наблюдался при воздействии высоких концентраций адреналина на молодые клетки (Кленова, 2006).
Целью данного исследования стало изучение образования пептидных соединений во фракциях молодых и старых эритроцитов при действии различных концентраций экзогенного цАМФ, АТФ и блокировании фосфодиэстеразы цАМФ эритроцитов имидазолом. Объектом исследования служила чистая фракция эритроцитов человека, разделенная на молодые и старые клетки по методу Т.В. Аврамовой и соавт. (1975). Результаты показали, что действие экзогенного цАМФ в концентрациях 100 и 200 мкг/мл приводило к увеличению содержания пептидов в клетках на 37% и 85% соответственно концентрации добавления и не зависело от возраста клеток. Добавление экзогенного АТФ в тех же концентрациях также вызывало увеличение содержания пептидов на 38% и 60%, соответственно, сходно в обеих фракциях. Блокирование фосфодиэстеразы цАМФ добавлением 43 и 72 мкг/мл имидазола также привело к достоверному увеличению пептидных соединений на 20% и 30%, соответственно сходно во всех фракциях. Результаты проведенной гель-хроматографии указывают на присутствие пептидных молекул, сходных по молекулярной массе (более 1000 Да), при повышении концентрации цАМФ в эритроцитах.
Таким образом, активность примембранного комплекса протеаз определяется содержанием цАМФ в клетке и ее энергоресурсом и, в данном случае, не зависит от состояния мембраны, поскольку активация осуществлялась без участия сигнальных систем мембраны эритроцита.