BioScience Blog – Научный Биологический блог

Канова Е.В., Чернышов С.В.

Самарский государственный университет, Самара (Россия),

Филиал Учреждения российской академии наук Института биоорганической химии им. академиков М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова, Пущино (Россия).

E-mail: svch2@rambler.ru

Инициация транскрипции генов прокариот – сложный процесс, обеспечиваемый мультисубъединичным ферментом РНК-полимеразой. Существенная роль в специфичности узнавания промоторов принадлежит сигма-субъединеце (у) этого фермента. Целью работы является исследование экспрессии в клетках E. coliрепортерного гена зеленого флуоресцирующего белка, поставленного под промоторы Arobacteriumtumefaciens, в присутствии и отсутствии у-субъединицы РНК-полимеразы агробактерий. Для этого методом ПЦР при использовании в качестве матрицы геномной ДНК A. tumefaciensбыл синтезирован ген rpoDу-субъединицы и поставлен под контроль конститутивного и индуцибельного промоторов. В качестве конститутивного был использован промотор PCH, а в качестве индуцибельного промотор фага T7. Осуществлена количественная оценка экспрессии этого гена в клетках кишечной палочки в условиях индукции и без неё. Для дальнейшего проведения экспериментов по комплементации ген rpoDбыл клонирован в векторах с различными системами репликации на основе плазмид ColE1 и p15. Проведена сравнительная оценка экспрессии гена при использовании этих конструкций. Экспериментально показаны различия в уровнях синтеза у-субъединицы в зависимости от выбора промотора, условий индукции и типа вектора. Оптимизированы условия синтеза этого белка для проведения комплементации между кор-ферментом РНК-полимеразы E. coliи у-субъединицей агробактерий.