BioScience Blog – Научный Биологический блог

Терминация трансляции, заключительная стадия биосинтеза полипептидной цепи, происходит в тот момент, когда в А-участке рибосомы оказывается один из трех стоп-кодонов транслируемой мРНК – UAA, UAG или UGA. Ключевую роль в этом процессе играет белковый фактор терминации трансляции eRFl. Он принимает участие в узнавании стоп-кодона и в гидролизе пептидил-тРНК.

Целью настоящей работы является идентификация и характеристика элементов фактора терминации трансляции eRFl, ответственных за узнавание стоп-кодонов.

Получено более 50 мутантных факторов терминации с точечными заменами более чем по 20 позициям в N-домене eRFl человека. Определена их функциональная активность в реконструированной системе трансляции эукариот. Среди проанализированных белков особо выделяются мутантные eRFl с заменами по положениям S36, С127, F131, Е55 и Y125. При заменах S36T и C127S наблюдается небольшое падение функциональной активности по UAA и UAG. Замены S3 61, С127А и F131A приводят к практически полному падению функциональной активности по UAA и UAG стоп-кодонам. Эти данные указывают на важность полярных группировок боковых цепей аминокислот S3 6 и С127 для узнавания второго А в стоп-кодонах UAA и UAG. При замене F131Y влияние на функциональную активность по этим стоп-кодонам не столь драматично, как при замене F131A, что позволяет предположить, что F131 вступает в стекинг-взаимо действия со вторым А в стоп-ко донах. Для мутантных eRFl с точечными заменами Y125A, Y125F, Е55А, E55Q наблюдается падение активности по UAG, что позволяет предположить, что эти аминокислоты ответственны за узнавание третьего G в стоп-кодоне UAG. Таким образом, на основании полученных данных предполагается, что второй А в стоп-кодонах UAA и UAG узнается аминокислотами F131, S36, С127, а третий G в стоп-кодоне UAG узнается аминокислотами Y125 и Е55.