BioScience Blog – Научный Биологический блог

Кравченко О.В., Митрошин И .В., Никулин А.Д. и др.

Институт белка РАН, Пущино (Россия), Биоцентр, Медицинский университет, Иннсбрук (Австрия).

E-mail: olesyak@rambler.ru

Боковой L12-выступ большой рибосомной субчастицы образован комплексом рибосомных белков L10 и L12 и взаимодействует с доменом II 23 S рРНК посредством белка L10. L12-выступ участвует во взаимодействии рибосомы с факторами трансляции. Он необходим для стимулирования фактор-зависимого гидролиза ГТФ на рибосоме и играет важную роль в контроле точности трансляции. Из-за высокой подвижности данного выступа его кристаллическая структура не может быть определена в составе рибосомы. Поэтому определение структур отдельных элементов этого рибосомного выступа является актуальной задачей.

При стоянии в растворе рибосомный белок L10 из M. jannaschiiбыстро расщепляется с образованием стабильного РНК-связывающего N-концевого фрагмента белка. Получены кристаллы данного фрагмента белка, отражающие рентгеновские лучи в зоне низкого разрешения. Для того чтобы улучшить качество полученных кристаллов необходимо нарабатывать и выделять стандартный и гомогенный препарат белка. Методом масс-спектрометрии была установлена молекулярная масса кристаллизующегося фрагмента белка. Так же была определена последовательность его N-концевых аминокислотных остатков. На основании этих данных была определена аминокислотная последовательность данного фрагмента белка. Был клонирован и экспрессирован фрагмент гена белка L10, кодирующий N-концевой фрагмент данного белка. Были получены кристаллы как немодифицированного фрагмента белка L10, так и его селенометиониновых производных, дающие дифракционную картину высокого разрешения.