BioScience Blog – Научный Биологический блог

Механизмы, которые лежат в основе успешной беременности, включают формирование иммунологической толерантности в отношении плода. Важную роль в поддержание этих механизмов играют гормоны плаценты [1]. Одним из основных гормонов беременности является эстриол (Е3), продуцируемый фетоплацентарной единицей с 7-й нед. К концу беременности его уровень возрастает практически в 10 раз [2]. Вопрос о роли данного гормона в регуляции иммунных реакций при беременности остается открытым, несмотря на то, что рецепторы для Е3 экспрессируются на клетках иммунной системы.

Цель настоящей работы — исследование влияния Е3 в дозах, сопоставимых с уровнями гормона в I и III триместрах беременности, на окислительную и фагоцитарную активность нейтрофилов и моноцитов крови женщин.

Мононуклеарные клетки (МНК) и нейтрофилы выделяли из гепаринизированной венозной крови небеременных женщин путем центрифугирования в двойном градиенте плотности фиколл-верографина (1,077 и 1,112 г/мл) [3]. С верхней интерфазы собирали МНК, с нижней — нейтрофилы. Затем из МНК выделяли моноциты путем адгезии на чашках Петри методом двойного пассажа [3]. Е3 использовали в физиологических концентрациях, соответствующих его уровню в периферической крови в I и III триместрах беременности, — 2 и 20 нг/мл соответственно [2].

Фагоцитарную активность нейтрофилов и моноцитов оценивали по степени гашения биолюминесценции бактерий штамма E.сoli lux+,
которые являлись объектом фагоцитоза. Результаты представляли в виде индекса фагоцитарной активности (ИФА), который рассчитывали по формуле: ИФА=100Ч(Х1-Х2)/Х1, где Х1 — интенсивность биолюминисценции контрольной пробы (бактерии), Х2 — опытной пробы (бактерии + фагоциты)

[4].

Окислительную активность фагоцитов оценивали по интенсивности спонтанной и стимулированной люминол-зависимой хемилюминесценции (ЛЗХЛ) [5]. Динамику фагоцитоза и ЛЗХЛ оценивали на люминоскане «Ассент» (Финляндия), в течение 30 мин, производя замеры через каждые 10 мин. Результаты выражали в отн. ед. свечения (RLU). Статистическую обработку проводили с использованием парного t-итериякр Стьюдента.

В результате проведенных исследований установлено, что низкая доза Е3 снижает фагоцитарную активность нейтрофилов на 20-й мин, а высокая на 30-й мин. На моноциты Е3 не оказывает статистически значимого влияния.

При оценке ЛЗХЛ показано, что гормон в обеих концентрациях повышает уровень как спонтанной, так и стимулированной ЛЗХЛ только нейтрофилов. При этом низкая доза стимулирует ЛЗХЛ только на этапе инициации реакции, а высокая – на этапе инициации и на 10-й мин реакции. В отношении моноцитов Е3 влияет только на стимулированную ЛЗХЛ и только в дозе 2 нг/мл, повышая уровень активности клеток на 20-й и 30-й мин.

Анализируя данные, полученные в ходе эксперимента, можно говорить о том, что нейтрофилы, в отличие от моноцитов, более чувствительны к действию гормона. Е3 влияет на их фагоцитарную активность, а также на спонтанную и стимулированную ЛЗХЛ, усиливая ее на ранних стадиях, включая этап инициации. Моноциты в меньшей степени подвержены действию гормона, который оказывает влияние только на процесс индуцированной генерации активных форм кислорода. Таким образом, благодаря дифференцированному влиянию на нейтрофилы и моноциты, Е3 формирует низкий уровень функциональной активности интактных клеток, усиливая их окислительный потенциал при микробной инвазии.

Литература

1.                                         Ширшев   С.В.   Механизмы  иммунного   контроля  процессов репродукции. – Екатеринбург: УрО РАН, 1999. – 273 c.

2.                                        Kase N.G., Reyniak J.V. Endocrinology of pregnancy // Mount Sinai J. Med. – 1985. – V. 52. – P. 11-34.

3.                                        Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля, Пер. с нем. А.П. Тарасова. – М.: Медицина, 1987. – 472 с.

4.                                         Ширшев С.В. и дрт. Па. РФ № 2292553 // Бюл. 2007. – № 3.

5.                                         Tono-Oka T. et al. Chemiluminescence of whole blood. 1. A simple and rapid method for the estimation of phagocytic function of granulocytes and opsonic activity in whole blood // Clin. Immunol. Immunopathol. — 1983. — V. 26, № 3.-P. 66-75.