BioScience Blog – Научный Биологический блог

Пуповина человека – источник клеток различных типов. В культуре можно обнаружить веретенообразные, эндотелиальные, округлые и отростчатые клетки. Особый интерес представляют мезенхимальные стволовые клетки (МСК). Однако при культивировании мультиклеточного материала возникают некоторые сложности. Клетки имеют разную степень адгезии, разные типы клеток имеют различные формы контактов. Целью нашей работы было изучение влияния обогащенной тромбоцитами плазмы (ОбТП) на морфологические характеристики мультиклеточных культур и степень дифференциации МСК. Клетки культивировались на среде DMEM с низким содержанием глюкозы, с 5% аутологической сыворотки (АС). Для создания подложки культуральная посуда обрабатывалась фибронектином и гиалуроновой кислотой. ОбТП – относительно новая добавка к культуральным средам. Она содержит до 35 различных ростовых факторов и биологически активных веществ, которые способствуют более интенсивному росту клеток и влияют на степень их дифференциации. Для оценки морфологии клеток были использованы, адаптированные для данного материала, методики окраски гематоксилином и эозином, Суданом III. Оценивалась форма клеток, вид отростков, степень вакуоляризации, расположение ядра, количество ядрышек, тип формирования монослоя. Для оценки состояния ядерного материала был применён флюоресцентный краситель Hoechst 33342. Морфометрические данные были получены с помощью специализированного программного обеспечения. Аутологическую ОбТП получали с помощью методики двойного центрифугирования. Активация выброса содержимого альфа-гранул производилась путём индукции коагуляции раствором хлорида кальция и сухим тромбином. Клетки из кордового материала были получены следующими способами: вымыванием из вены по стандартной методике с использованием коллагеназы; путём посева измельчённых кусочков пуповины без ферментативной обработки. Оптимальной концентрацией ОбТП для поддержания морфологических характеристик стволовых клеток, согласно нашей работе, является 5%. Наилучший эффект наблюдался при комбинировании 5% АС и 5% ОбТП. В

результате исследования показано, что ОбТП повышает способность клеток пуповины прикрепляться к субстрату даже при отсутствии сыворотки. Также ОбТП повышает пролиферативную активность клеток. При добавлении ОбТП наблюдалось повышенное количество МСК в культуре, по сравнению с контрольными образцами, где преобладали другие типы клеток. Работа находится на начальном этапе и в наших планах – изучение влияния ОбТП на хондро – и адипогенез МСК из пуповины, и экспрессию внутриклеточных белков.