BioScience Blog – Научный Биологический блог

Соловьёв К.В., Грудинина Н.А., Шавловский М.М.

НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН, Санкт-Петербург (Россия).

E-mail: kaknikak@gmail.com

Транстиретин (ТТР, преальбумин) – один из белков склонных к аномальному фибриллогенезу и непосредственно участвующий в формировании амилоида. Этот белок является транспортером тироксина и ретинол-связывающего белка. Описано значительное число мутантных форм ТТР, cамой амилоидогенной из которых на данный момент считается форма   ТТР(L55P).    Фибриллы    ТТР    обнаруживаются    при    семейной    полинейропатии, кардиомиопатии и старческом системном амилоидозе. Склонность белка дикого типа и его мутантных форм к фибриллогенезу, а также доступность в литературе данных по клиническим проявлениям экспрессии мутантных генов ТТР создает благоприятные условия для использования условий фибрилогенеза исходного природного белка и его рекомбинантных мутантных форм в качестве модели.

В задачи исследования входило создание экспрессионных генетических конструкций, кодирующих белок слияния ТТР-GFP, трансфекция эукариотических клеток, изучение внутриклеточного распределения GFP и белков слияния, локализации белков слияния, образованных ими фибрилл (или их агрегатов), в клеточных компартментах. Также планировалось выявление фибриллярных структур при помощи специфического окрашивания тиофлавином S.

Нами были получены генетические конструкции экспрессирующеся в эукариотических клетках. Методом конфокальной микроскопии было показано, что синтезируемые белки слияния ТТР(L55P) и ТТР(WT) образовывали агрегаты внутри клеток, в отличие от GFP, распределявшегося по клетке равномерно. Наблюдалась фрагментация ядра в клетках экспрессирующих белки слияния ТТР(L55P) и ТТР(WT), в отличие от клеток экспрессирующих только GFP. В дальнейшем планируется использовать регулируемую экспрессию белков слияния для избежания возможных неспецифических эффектов.