BioScience Blog – Научный Биологический блог

Прогестерон (Pr) очень важен для сохранения беременности не только как блокатор эндометриального синтеза простагландинов и трофический фактор матки, но и как агент, препятствующий иммунному отторжению плода [1].

Нейтрофилы — наиболее многочисленная популяция лейкоцитов — являются основными клеточными эффекторами неспецифической защиты организма, которые модулируют свои свойства в период гестации. Также нейтрофилы известны как активные участники родовой деятельности [2], в связи с чем исследование гормональной регуляции их функций является актуальной проблемой иммунологии репродукции.

Цель настоящей работы — оценка влияния Pr на фагоцитарную активность нейтрофилов, ределитьа также оп механизмы взаимодействий лимфоцитов и нейтрофилов в регуляции процесса фагоцитоза.

В работе использовали сепарированные нейтрофилы и лимфоциты периферической венозной крови здоровых небеременных женщин репродуктивного возраста, полученные в фолликулярную фазу менструального цикла. Для выделения мононуклеаров и нейтрофилов использовали двойной градиент плотности фиколл-верографина. Плотности верхнего и нижнего градиентов составили 1,077 и 1,112 г/мл, соответственно. Для отделения лимфоцитов от моноцитов использовали метод двойного пассажа на чашках Петри. Pr использовали в концентрациях 20 и 100 нг/мл, отражающих его уровни в крови в I и III триместрах беременности, соответственно [3].

Нейтрофилы инкубировали с Pr в течение часа, после чего оценивали их фагоцитарную активность по степени снижения свечения люминесцентного генно-инженерного маштам бактерий E.coli lux+ при их поглощении клетками [4]. Лимфоциты также были проинкубированы с гормоном в течение часа, после чего их супернатанты и отдельно клетки были добавлены к интактным нейтрофилам, у которых затем оценивали фагоцитарную активность вышеописанным способом. Концентрацию цитокинов в супернатантах мононуклеаров определяли методом иммуноферментного анализа с помощью коммерческих наборов (ООО «Цитокин»).

Статистическая обработка результатов проводили с использованием парного t-критерия Стьюдента. Результаты считали достоверными при р<0,05.

При исследовании влияния Pr на фагоцитарную активность нейтрофилов выявлено, что гормон угнетал ее вне зависимости от дозы. Под действием супернатантов лимфоцитов, предварительно проинкубированных с Pr, процент фагоцитирующих нейтрофилов также снижался. Причем фагоцитоз нейтрофилов сильнее угнетался под действием супернатантов, чем дпо влиянием самого гормона.

Учитывая, что Pr усиливает продукцию IL-10 [5], в дальнейшем нами был исследован уровень этого цитокина в супернатантах, вызывающих угнетение нейтрофильного фагоцитоза. Установлено, что Pr приводит к статистически значимому повышению IL-10 в супернатантах лимфоцитов даже при часовой инкубации. Таким образом, снижение фагоцитарной активности нейтрофилов под действием супернатантов Pr-обработанных лимфоцитов, может быть непосредственно связано с IL-10.

Совместная инкубация интактных нейтрофилов с лимфоцитами, предварительно    проинкубированными    с    Pr,    напротив оказала стимулирующее воздействие на фагоцитарную активность нейтрофилов. По-видимому, данный эффект связан с контактными взаимодействиями нейтрофилов и лимфоцитов, которые и обеспечивают усиление фагоцитарной активности нейтрофилов. Показано, что действие Pr обусловлено Ca2+-зависимым механизмом [6], который приводит к повышению экспрессии интегрина LFA-1. Нейтрофилы в свою очередь экспрессируют его лиганд – молекулу межклеточной адгезии-1 (ICAM-1)[7]. Таким образом, можно полагать, что именно этим и обусловлены контактные взаимодействия Pr-обработанных лимфоцитов с интактными нейтрофилами, что в свою очередь приводит к оппозитному эффекту – усилению фагоцитарной активности последних.

Литература

1.                               Rothchild T. Role of progesterone in initiating and maintaining pregnancy // Progesterone and Progestins / Eds. Bardin C.W., Milgrom E., Mauvais-Jarvis P.N. Y.:Raven Press. – 1983. – P. 219-229.

2.                                              Ширшев   С                                             анизмы.В.Мех   иммунноэндокринного   контроля процессов репродукции. Т. 2. – Екатеринбург: УрО РАН, 2002. – 585 с.

3.               Kase N.G., Reyniak J.V. Endocrinology of pregnancy // Mount Sinai J. Med. – 1985. – V. 52. – P. 11-34.

4.                                   Ширшев С.В и др. Пат. 2292553 РФ. Способ определения фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови человека по степени гашения биолюминесценции. Опубл. 27.01.07, Бюл. № 3.

5.               Szekeres-Bartho J. et al. The immunological pregnancy protective effect of progesterone is manifested via controlling cytokine production // Am. J. Reprod. Immunol. – 1996. – V. 35. – P. 348-351.

6.                                     Некрасова И.В., Ширшев С.В.. Изменение фагоцитарной и окислительной активности нейтрофилов под емдействи    женских половых стероидных  гормонов  //  Сборник  тезисов  IV  молодежной  научной конференции. «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике». Сыктывкар, 2005. — С. 67-69.

7.                      Springer T.A. Adhesion receptors in the immune system // Nature. – 1990. – V. 346. – P. 425-434.