BioScience Blog – Научный Биологический блог

Розанов А.С., Сорокина К.Н., Пельтек С.Е.

Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск (Россия), Институт катализа имени Г.К. Борескова СО РАН, Новосибирск (Россия). E-mail: asroza@gmail.com

Изучение метаболических путей штаммов микроорганизмов, не являющимися традиционными объектами для молекулярной биологии, с целью их модификации, может стать наиболее эффективным с использованием уже существующих методов и векторных систем Е.coli. В своей работе мы провели анализ возможности трансформации инородной ДНК клеток Klebsiellapneumoniae(являющейся продуцентом некоторых ценных химических веществ) различными методами, что в дальнейшем может использоваться для модификации генома бактерии.

Основной проблемой модификации грамположительной бактерии K. Pneumoniaeпо литературным данным является крайне низкая эффективность трансформации. Для трансфекции мы использовали плазмиду pBR322, несущую ген устойчивости к тетрациклину и плазмиду pET28a несущую ген устойчивости к канамицину. Стандартную для выполнения подобных работ pUC18 не использовалась, так как штамм Klebsiellapneumoniae, выделенный нами, обладает устойчивостью к ампицилину. В работе путем оптимизации условий культивирования клеток (состав среды, плотность культуры, температура) нам удалось добиться значительного увеличения эффективности электротрансформации вплоть до 107. Таким образом, данная методика позволит значительно расширить возможности генетической модификации бактерии K. pneumoniae.