ОСОБЕННОСТИ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК СПЭВ
Шевцова А.С., Козловская Л.И., Рогова Ю.В., Романова Л.Ю., Карганова Г.Г.
ГУ ИПВЭ им.М.П.Чумакова РАМН, Московская обл. (Россия).
E-mail: karganova@bk.ru
Ранее было показано, что адаптация к клещам штамма ЭК-328 вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) привела к селекции варианта М с мелкобляшечным фенотипом, повышенной сорбцией на гликозаминогликанах (ГАГ) клетки, замедленной репродукцией в клетках СПЭВ и низкой вирулентностью при периферическом введении для мышей. Сравнение геномов штамма ЭК-328 и варианта М выявило аминокислотные замены в белках Е, prM, NS2A, NS4A и нуклеотидные замены в 5′-НТО. Ревертант, полученный при переадаптации варианта М к клеткам СПЭВ, восстановил родительский фенотип и был генетически идентичен варианту М, исключая аминокислотные замены в поверхностном гликопротеине Е.
Целью данного исследования было изучение цикла репродукции данных вариантов ВКЭ в культуре клеток СПЭВ для установления корреляции между генетическими детерминантами вируса и патогенезом клещевого энцефалита. В результате работы было показано, что соотношение свободного и связанного с клетками вируса зависит от множественности заражения и аффинности связывания вирионов с ГАГ клетки. Для всех исследуемых вирусов при высокой множественности заражения соотношение количества инфекционных частиц (титрование методом бляшек) к количеству копий вирусной РНК (ПЦР в реальном времени) в КЖ значительно изменяется в процессе инфекции от 1:30 до 1:300. При низкой множественности заражения для штамма ЭК-328 и ревертанта на определенном этапе инфекции все вирусные частицы могут быть инфекционны, а для варианта М при снижении множественности заражения доля инфекционных частиц в КЖ уменьшается.
Была изучена динамика накопления ИФН 1 типа в КЖ инфицированных клеток. Все варианты ВКЭ различались по уровню индукции ИФН, по оптимальной заражающей дозе и времени максимальной продукции ИФН.
Loading ...