ПОДГОТОВКА ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ СКАНИРУЮЩЕЙ ЗОНДОВОЙ МИКРОСКОПИИ
Май Бить Зунг
Белгородский государственный университет, Белгород (Россия). E-mail: xuyenchi612@yahoo.com
Широкое внедрение в экспериментальную практику методов сканирующей зондовой микроскопии для изучения морфологии клеток, требует специального приготовления препаратов. Методической трудностью, возникающей при сканировании живых клеток, является их прочная естественная адгезия к стеклу. В связи с этим, целью исследования было разработать способ приготовления препаратов крови для СЗМ исследований, на основе естественной адгезии клеток крови к поверхности подложки.
Объектом исследования была кровь лягушек RanaridibundaPall. Препараты готовили на чистых стеклянных подложках, на стеклянных подложках предварительно обработанных средой Хенкса № 199, содержащей Са2+, а также на стеклянных подложках, обработанных аутологичной плазмой. Обработку стекол проводили путем их помещения в среду № 199 и аутологичную плазму на 1-2 минуты, затем сушили их на воздухе, после чего делали на них мазки крови общепринятыми способами. На каждой из подложек делали мазки в двух повторностях, одни являлись опытными, другие – контрольными. Приготовленные мазки крови инкубировали на воздухе в течение 30 минут. По истечении времени инкубации с опытных мазков делали смывы клеток буферным раствором. Контрольные мазки оставляли интактными. Затем производили окраску контрольных и опытных мазков по Романовскому. Производили подсчет адгезировавших клеток на мазках в 10 полях зрения с помощью сетки Автандилова, площадью 14 мм2. Процент адгезировавших клеток рассчитывали, принимая за 100% количество клеток в 10 полях зрения, просчитанных в контрольных мазках. В результате проведенных экспериментов установлено, что эритроциты не адгезируют на стеклянных подложках ни при одном из примененных способов обработки. На мазках после смыва обнаруживаются единичные стромальные элементы и лейкоциты. Наибольший процент адгезировавших лейкоцитов отмечен к чистым обезжиренным стеклянным подложкам (92,6%), наименьший – к стеклам, обработанным средой Хенкса № 199 (33,7%), 65,23% клеток адгезировало к стеклам, смоченным аутологичной плазмой.
Основную роль в процессе адгезии клеток исследователи отводят углеводным компонентам фибронектина, которые входят в состав гликокаликса. Вероятно, эти компоненты в мембранах лягушек имеют специфическую природу и особенности функционирования.
Loading ...