BioScience Blog – Научный Биологический блог

О.В. КОВЕЗА

В настоящее время поиск молекулярных маркеров для решения задач по картированию и изучению генома высших растений представляет собой одну из важных и актуальных задач генетики. Одним из методов выявления генетических маркеров у растений является RAPD метод (метод полимеразной цепной реакции с короткими случайными праймерами). Цель данной работы состояла в выявлении и клонировании RAPD-маркеров ДНК гороха. Для этого было проведено исследование полиморфизма ДНК RAPD методом 4 сортов и 19 линий гороха с использованием шестнадцати праймеров. В результате были обнаружены полиморфные фрагменты ДНК, присутствующие у одних линий и сортов гороха и отсутствующие у других. Среди полиморфных фрагментов было найдено 3 уникальных фрагмента, характерных только для данных линий и сортов, и не обнаруженных ни в одной из других исследованных линий. Уникальные фрагменты были обнаружены в таких линиях и сортах, как Рапорт, L-1238 и L-111.

Для подтверждения наследуемости данных уникальных и некоторых полиморфных фрагментов было проведено исследование гибридов первого и второго поколения. В результате проведенной работы четко показан доминантный характер наследования молекулярных маркеров.

Обнаруженные RAPD-маркеры линий L-111 и L-1238, а также сортов Рапорт и Пионер были клонированы при помощи pGEM-T вектора. Проведено секвенирование уникального фрагмента линии L-111 размером 750 п.о., полученного при амплификации с использованием праймера B474.