Разрушение нуклеоидов в клетках Anacystis nidulans при окислительной обработке
Булахов А.В., Молчанова Д.В., Шестак А.А., Киселевский Д.Б.
Ранее показано, что внутриклеточное образование Н2О2 при действии менадиона (100 мкМ), а также добавление Н2О2 (5-10 мМ) ингибировали рост клеток AnacystisnidulansиАпаЬаепа variabilis(Самуилов и др., 1999). Менадион, акцептор электронов в реакции Хилла, восстанавливается компонентами электронтранспортной цепи цианобактерий и самопроизвольно окисляется СЬ с образованием супероксидного анион-радикала и Н2О2. Мы исследовали влияние окислительной обработки на образование активных форм кислорода (АФК) и состояние нуклеоидов у цианобактерий A. nidulansв логарифмической и стационарной фазах роста клеток. Образование Н2Ог в клетках А. nidulansопределяли по флуоресценции 2′,7′-дихлорфлуоресцеина (DCF), образующегося в результате ШСЬ-зависимого окисления 2′,7′-дихлорофлуоресцина DCFH.
Менадион и Н2О2 вызывали рост флуоресценции DCF в клетках, который подавлялся антиоксидантами: тролоксом и ]Ч-ацетил-Ь-цистеином. Исследовали состояние нуклеоидов
A. nidulansпри окислительной обработке: 5 мМ Н2Ог, 100 мкМ менадиона. Флуоресцентная микроскопия с красителем 4′,6′-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI), связывающимся с ДНК, показала, что в контроле (без добавок) нуклеоиды окрашивались у 90-100% клеток, находящихся в логарифмической фазе роста. Флуоресценция DAPI исчезала у 25% клеток при их обработке менадионом и у 35% клеток при обработке Н2О2 в течение 24 ч, что, очевидно, связано с распадом нуклеоидов. И-Ацетил-Ь-цистеин, добавленный на фоне менадиона, предотвращал разрушение нуклеоидов. Менадион и Н2О2 не вызывали разрушение нуклеоидов клеток, находящихся в стационарной фазе роста.
Полученные результаты показывают, что окислительная обработка вызывает разрушение нуклеоидов A. nidulansв логарифмической фазе роста, которое подавляется антиоксидантами. В логарифмической фазе роста клетки A. nidulansболее чувствительны к окислительной обработке, чем в стационарной.
Самуилов В.Д., Безряднов Д.В., Гусев М.В., Киташов А.В., Федоренко Т.А. ШСЬ ингибирует рост цианобактерий. // Биохимия, 1999, 64 (1), 60-67.
Loading ...