BioScience Blog – Научный Биологический блог

Функция клеточных белков в транспорте вирусов в зараженном растении представляет значительный интерес. Недавно было показано, что для транспорта умбравируса мозаики арахиса по проводящей системе растения необходим белок ядрышка фибрилларин [1]. Белок дальнего транспорта умбравируса транспортируется в ядра, проходит в ядрышки, где колокализуется с фибрилларином, а затем возвращается назад в цитоплазму. Этот процесс сопровождается перемещением фибрилларина в цитоплазму и абсолютно необходим для формирования в цитоплазме вирусных рибонуклеопротеидных частиц (вРНП), требующихся для дальнего транспорта вируса. Выявлено прямое взаимодействие между белками invitro[2], которое необходимо как для экспорта фибрилларина из ядра, так и для образования транспортного вРНП. Наши данные указывают на возможность реализации аналогичного механизма у другой таксономической группы вирусов – гордеивирусов.

С помощью стандартных методов клонированы полноразмерные гены вирусного и клеточного белков и их делеционные варианты. Рекомбинантные белки экспрессировали в E. coliи очищали с помощью аффинной хроматографии на Ni-NTA-агарозе. Белок-белковые взаимодействия изучали Фар-Вестерн методом, взаимодействия белок-РНК – методом задержки в геле.

Показано, что рекомбинантный фибрилларин, экспрессированный в E. coli, взаимодействует с транспортным ТБГ1 белком гордеивируса полулатентного вируса мятлика (ПЛВМ), который, как и транспортный белок умбравируса, способен локализоваться в ядре и принимает участие в формировании вРНП. С помощью серии делеционных мутантов фибрилларина и ТБГ1 белка ПЛВМ локализованы участки гетерологичных белок-белковых взаимодействий в составе клеточного и вирусного белков. Ими оказались глицин-аргинин-богатый домен фибрилларина и участок в составе N-концевой части ТБГ1 белка. Возможно, что именно взаимодействие ТБГ1 белка с фибрилларином и участие последнего наряду с ТБГ1 белком в образовании вРНП комплексов необходимо для реализации функции дальнего транспорта гордеивирусов.

Литература

1. Kim SH, Ryabov EV, Kalinina NO, Rakitina DV, Gillespie T, MacFarlane S, Haupt S,

Brown JW, Taliansky M. Cajal bodies and the nucleolus are required for a plant virus

systemic infection.EMBO J. 2007 Apr 18;26(8):2169-79. Epub 2007 Apr5.

2.  Kim SH, Macfarlane S, Kalinina NO, Rakitina DV, Ryabov EV, Gillespie T, Haupt S,

Brown JW, Taliansky M. Interaction of a plant virus-encoded protein with the major

nucleolar protein fibrillarin is required for systemic virus infection. Proc Natl Acad Sci U S

A. 2007 Jun 26;104(26):1 1115-20. Epub 2007 Jun