Шафигуллина А.К., Ялвач М.Э., Исламов Р.Р., Киясов А.П., Шахин Ф., Ризванов А.А. МОРФОЛОГИЧЕСКИЙ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ЗАЧАТКОВ ЗУБОВ МУДРОСТИ ЧЕЛОВЕКА
На сегодняшний день одним из перспективных источников стволовых клеток взрослого организма являются зачатки зубов. Эти зачатки содержат в себе стволовые клетки, которые могут быть выделены и адаптированы для культивирования в лабораторных условиях [1,2]. Подобные клетки характеризуются клоногенностью и способностью к дифференцировке в различные клеточные типы, в том числе в клетки костной, соединительной, жировой [1,2] и нервной ткани [3]. Дедифференцированное состояние и способность стволовых клеток к самообновлению обусловлена, в числе прочего, факторами транскрипции Oct4, Sox2, Nanog, cMyc и Klf4.
Цель настоящей работы — выделение МСК из зачатков зубов мудрости человека и провести их морфологический и молекулярно-генетический анализ.
Культура МСК была получена методом эксплантации из зачатков зубов мудрости подростков (условия культивирования: среда DMEM с пониженным содержанием глюкозы, 10% FBS, 1х пенстреп, 5% CO2, 37°С). Для выявления поверхностных и внутриклеточных антигенов был использован метод проточной цитофлуорометрии и иммунофлюоресценции с применением специфических моноклональных антител анти-CD34, CD45, CD73, CD90, CD105, CD133. Уровень экспрессии генов факторов транскрипции определялся с использованием ОТ-ПЦР в реальном времени с использованием праймеров и проб TaqMan. В качестве контроля использовалась общая РНК эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) человека.
Методом проточной цитофлуорометрии показано, что клетки, полученные путем эксплантации из зачатков зубов мудрости человека, имеют фенотип CD73+, CD90+, CD105+, CD34-, CD45-,CD133 – (рис. 1), что свидетельствует о морфологическом сходстве клеток зачатков зубов с мезенхимальными стволовыми клетками. Иммунофлюоресцентный анализ с использованием анти-CD73 и CD 105 антител подтвердил данные проточной цитофлуорометрии.
Количественный анализ экспрессии исследуемых генов в культуре клеток, полученных из зачатков третьих моляров, показал, что уровень экспрессии генов Oct4 и Nanog в > 500 раз ниже, чем у ЭСК, Sox2 приблизительно в 10 раз ниже, чем у ЭСК, cMyc на уровне ЭСК, Klf4 в 1000 раз выше, чем у ЭСК. Иммунофлюоресцентный анализ полученной культуры клеток с использованием анти-Klf4 антител подтвердил высокий уровень экспрессии белка. На сновании полученных результатов можно предположить, что клетки, выделенные из зачатков третьих моляров человека, обладают свойствами мезенхимальных стволовых клеток с высокими уровнями экспрессии факторов транскрипции и могут быть предложены в качестве альтернативного источника клеток для генно-клеточной терапии различных заболеваний человека.
Литература
1. Mosczeck C. et al.
Isolation of precursor cells (PCs) from human dental follicle of wisdom teeth // Matrix Biology. – 2005. – V. 24. – P. 155-165.
2. Lindroos B. et al. Characterisation of human dental stem cells and buccal mucosa fibroblasts // Biochem. Biophys. Res. Commun. – 2008. – V. 368, №2.-P. 329-335.
3. Yao S. et al. Differentiation of stem cells in the dental follicle // J. Dent. Res. – 2008. – V. 87, № 8. – P. 767-771.
Loading ...