BioScience Blog – Научный Биологический блог

Известно, что цианобактерии являются предшественниками хлоропластов растений, биогенез которых регулируется фитогормонами, в частности цитокинином и абсцизовой кислотой. В связи с этим задачей настоящей работы было показать наличие элементов гормональной системы у цианобактерии, характерных для растений. Ранее было показано, что в клетках Synechocystissp. PCC 6803 присутствуют физиологически активные цитокинины в количествах сопоставимых с их содержанием в высших растениях. О наличии гормон-связывающих белков в Synechocystissp. PCC 6803 данных не было. Выделение цитокинин-связывающих (ЦСБ) белков проводили, используя сложную многоступенчатую систему очистки и разделения белков, включающую гидрофобную хроматографию на фенил-сефарозе и аффинную хроматографию на колонке с зеатином-рибозидом, а также использовали разделение белков по Pi в нативных условиях на приборе Rotofor (Bio-Rad, США) и с помощью двумерного электрофореза в денатурирующих условиях. Идентификация ЦСБ проводилась с помощью полученных нами и очищенных антиидиотипических антител (АТа-и) к цитокинину, которые фактически являются антителами к рецептору гормона. Белки, связывающиеся с АТа-и, не взаимодействуют с преиммунными AT и AT, полученными к зеатину, что говорит о высокой специфичности взаимодействия ЦСБ с АТа-и. ЦСБ активировали в присутствии транс-зеатина тотальную транскрипцию invitroв системе, содержащей лизированные клетки цианобактерии. Исследование белков в одномерном и двумерном электрофорезе с последующим иммуноферментным анализом показало наличие белка в области 67 кДа, связывающегося с АТа-и.