СВОЙСТВА ЛАККАЗ CERRENA UNICOLOR ВКМ F-3196
Лисова З.А., Леонтьевский А.А.
Пущинский государственный университет, Пущино (Россия),
Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН, Пущино (Россия).
E-mail: zoyapozhid@rambler.ru
Отобран эффективный продуцент лакказы – базидиомицет CerrenaunicolorВКМ F— 3196. Подобраны оптимальные условия культивирования С.unicolor(минеральная среда Кирка, индуктор – 0,1 мМ Cu2+). Из культуральной жидкости С.unicolorвыделены и очищены до электрофоретической гомогенности 2 изоформы лакказы: LacC1 и LacC2 (М 69 и 65 кДа, pI 4,05 и 3,85, соответственно). Углеводная часть молекул обеих изоформ представлена маннозой, степень гликозилирования – 10,9% – для LacC1 и 4,98% – для LacC2.
Трипсинолиз белков с последующим MALDI TOF MS анализом показал уникальные фингепринты для каждой изоформы, что позволяет считать два очищенных фермента разными изоформами – продуктами разных генов. КД спектроскопия показала преобладание в молекулах обоих белков в-структур.
Оптимумы рН для 2,6-диметоксифенола и АБТС для обеих изоформ лежат в кислой области. LacC1 была активна в более широком диапазоне рН и при нейтральных значениях рН. Установлено, что за взаимодействие с субстратом у лакказ отвечает одна ионогенная группа, в то время как за каталитическое превращение – две; рК ионогенных групп свободного фермента и фермент-субстратного комплекса имеют более низкие значения у LacС2, что и определяет её более кислый рН оптимум. Температурный оптимум – 550С и 500С для LacC1 и LacC2, соответственно. Время полуинактивации при 700С для LacC1 – 30 мин., для LacC2 – 5 мин. Обе изоформы имеют низкие константы Михаэлиса.
Была изучена реакция LacC1 с высокотоксичным ксенобиотиком – пентахлорфенолом (ПХФ). В присутствии медиатора – (1-гидроксибензотриазола) – LacС1 осуществляла трансформацию ПХФ, при этом содержание ПХФ снижалось на 85 % в течение 3-х часов, что указывает на эффективность применения систем LacC1/медиатор в качестве агентов первичной атаки при разработке технологических приемов очистки природных сред, загрязненных хлорфенолами для деградации ксенобиотиков.
Loading ...