BioScience Blog – Научный Биологический блог

Агарков А.А., Попова Т.Н., Шульгин К.К., Сущенко Е.А.

Воронежский государственный университет, Воронеж (Россия).

E-mail: AgAlAlek@mail.ru

Одним из главных патогенетических факторов в развитии многих заболеваний внутренних органов, в том числе и токсических поражений печени, является нарушение физиологического баланса между интенсивностью свободнорадикального окисления и функциональной активностью антиоксидантной системы (АОС) организма. К ферментативному звену АОС относится глутатионредуктаза (ГР) – фермент, осуществляющий НАДФН-зависимое восстановление окисленного глутатиона в его восстановленную форму.

В этой связи вызывает интерес исследование влияния рибозо-5-фосфата, являющегося метаболитом пентозофосфатного пути, в ходе которого образуется НАДФН, на активность ГР при введении веществ-протекторов при развитии токсического гепатита. В данной работе в качестве веществ-протекторов использовались тиоктовая кислота (ТК) и восстановленный глутатион (GSH).

Объектом исследования служили самцы белых крыс массой 150-200 г. Экспериментальный токсический гепатит (ЭТГ) у животных вызывали путем перорального введения    гепатотропного    токсина,     индуктора    токсического     поражения    печени    – тетрахлорметана, в виде раствора в вазелиновом масле в дозе 0,064 мл на 100 г веса животного после суточной пищевой депривации; ТК и GSH животным вводили в дозе 35 мг/кг и 150 мг/кг соответственно в течение 4-х дней эксперимента внутрибрюшинно после индуцирования ЭТГ. На четвертые сутки печень крысы извлекали и использовали для дальнейших исследований. Активность ГР определяли спектрофотометрически при 340 нм. За единицу активности (Е) принимали количество фермента, катализирующее образование 1 мкмоль продукта реакции за 1 мин при 25°С. Активность фермента выражали в виде удельной активности. Процедура очистки ГР из печени крысы включала: фракционирование белков сульфатом аммония в пределах насыщения 40-70%, гель-фильтрацию на сефадексе G-25, ионообменную хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе, концентрирование с помощью ячейки «Amicon», хроматографию на колонке с Тойоперл HW – 65.

При изучении влияния рибозо-5-фосфата на активность ГР из печени крыс, которым вводили GSH на фоне патологии был показан стимулирующий эффект. Наибольшая скорость ферментативной реакции наблюдалась при 0,1 мМ концентрации метаболита. При концентрации рибозо-5-фосфата более 0,8 мМ выявлено ингибирование ГР. Константа ингибирования составила 0,6 мМ, тип ингибирования – смешанный. При введении ТК на фоне патологического процесса выявлено незначительное активирующее действие рибозо-5-фосфата на ГР при низких концентрациях. При концентрации метаболита свыше 0,1 мМ наблюдается снижение ферментативной активности и при 1,2 мМ концентрации метаболита активность фермента составляет менее 50% от начальной. Установлен неконкурентный тип ингибирования, константа ингибированиясоставила 0,43 мМ.

Таким образом, показано, что рибозо-5-фосфат может принимать участие в регуляции активности ГР при введении протекторов на фоне патологии.