Фиксация олигонуклеотидов на поверхности живых клеток придает им искусственную аффинность к комплементарным последовательностям ДНК, что позволяет, например, за счет гибридизационных взаимодействий осуществить иммобилизацию ДНК-маркированых клеток на твердом носителе [1].
В настоящей работе предложен новый способ иммобилизации фрагментов ДНК на внешней поверхности живых клеток. Он основан на нековалентных гидрофобных взаимодействиях синтезированных нами жирнокислотных конъюгатов олигодезоксирибонуклеотидов с липидным бислоем плазматической мембраны.
Методами флуоресцентной микроскопии и проточной цитометрии показано, что конъюгаты при внесении в бессывороточную культуральную среду эффективно удерживаются на внешней мембране клеток, не изменяя их жизнеспособности. Для завершения всех процедур по иммобилизации необходимо, в отличие от известного способа [1], не трое суток, а всего несколько минут. Предложенный метод позволяет регулировать нагрузку ДНК на клетку в широких пределах. Показано, что иммобилизованные олигонуклеотиды сохраняют природную способность к гибридизации с комплементарными полинуклеотидами. Новый метод ДНК-маркирования клеток перспективен для создания биосенсоров, разработки новых подходов в инженерии тканей, получения искусственных межклеточных ассоциатов.
Литература
1. Chandra R.A. at all. //Angew Chem Int Ed Engl. 2006. V.45, №6, P.896-901.
Loading ...